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 來源:實驗動(dòng)物那些事兒 日期:2024.05.14 

小(xiǎo)鼠麻醉指導原則

目的

本文是由ARC獸醫人員設計的小鼠麻醉指(zhǐ)導原則,旨在提供一般(bān)建議。這並(bìng)不(bú)意味著它包(bāo)含了適用於小鼠的所有可能(néng)藥物組合的詳盡列表(biǎo)。具體的麻醉方案應根據特定情況和研究需求與所在機構的獸醫合作製定(dìng)。

麻醉(zuì)是使動物完全或部分失去感覺,伴隨或不伴隨意識喪失。動物可能需要麻醉進行手術(shù)、可能引起疼痛的非手術操作,或需要固定的非(fēi)疼痛操作。在麻醉前、麻醉過程(chéng)中和(hé)麻(má)醉後,必須采取措施確(què)保動物的安全和麻醉的有效性。

麻醉可通過胃腸外給藥或(huò)吸入給藥的方式進行。藥物的選擇取決於具體操作、研究目的(de)和其他(tā)因素,如動物的年齡。對於新生小鼠,有些特別考慮下文進行了(le)概述。如(rú)對藥物選擇有(yǒu)疑問,請谘詢(xún)所在機構的(de)獸醫。

01、麻醉的一般(bān)指導原則和注(zhù)意事項

適應期:建議所有(yǒu)動物在運輸後適應一周,以防止應激引起的反應。動物至少需要72小時才能恢複到基本生理狀態(tài)。

禁食:由於小鼠無法嘔吐,通常麻醉前無需禁食。然而,如需禁食(例如為了保持體重),因小鼠的高(gāo)代(dài)謝率,禁食時間不應超過2-3小時。請注意,切勿限製飲水。

眼睛保護:在(zài)麻醉狀態下,小鼠的眼睛會持續睜開,可能導致角膜幹燥和損傷(shāng)。因(yīn)此,在如下條件下,應(yīng)塗抹眼膏(如Puralube® 或 Lacrilube®)來保護眼睛。

麻醉持續時間超(chāo)過 5 min;

通過麵罩進行麻醉。

監護:無論使用何種麻醉劑(jì),均應監測麻醉狀態下的小鼠,以確保(bǎo)心髒和呼吸(xī)功能不被過度抑製,以及麻醉深度適當。

在沒有專用設備(bèi)的情況下,可以監測以下麻醉(zuì)小鼠的參數:

麻(má)醉(zuì)深度:通過掐指檢查;

呼吸頻率和模式:正(zhèng)常未受幹擾的呼吸率(lǜ)約為 180 bpm,麻醉期間可接受 50% 的緩慢下降速率(lǜ);

粘膜顏色:應為粉紅色而(ér)非藍色或灰色;

體溫:可使用直腸溫度計監測體溫,體溫應保持在 36℃ 以上;

血氧飽和度和心率:可用專用的齧齒類動(dòng)物脈搏式血氧儀監測血氧飽和度 (> 95%) 和心(xīn)率(300-800 bpm);

如對監護或監護設備有(yǒu)任何問題,請與所在機構的獸醫聯係(xì)。

保溫:所有種屬在麻醉狀態下均存在低體溫的(de)風(fēng)險。小鼠(shǔ)由於體表麵積與體重比高,尤其容易受到影響。低體(tǐ)溫對(duì)動(dòng)物會產生顯著的生理應激,可能(néng)延長恢複時間並有潛在致命風險(xiǎn)。

在所有麻醉(zuì)過程中提供額外的保溫措施。

補充熱源包(bāo)括循(xún)環水(shuǐ)毯、電熱(rè)墊和可在微波或水浴中加熱的市售(shòu)產品(如等溫(wēn)墊或凝膠加(jiā)熱器)。

切(qiē)勿直接(jiē)將動物放在熱源上。

如(rú)對使用或購買額外的保溫來源有疑問,請與您所(suǒ)在機構的獸醫聯係。

補液:在麻醉時間較長或動物患病、老年或虛弱的情況下,考慮腹腔或皮(pí)下(xià)注射溫熱的液(yè)體。更多信息請谘詢您的獸醫。

恢複:持續監測動物直至其完全恢複。

在幹(gàn)淨的籠子裏,將動物放在紙巾上(不使用墊料)。這樣可以最大程度地(dì)減少氣(qì)管阻塞或肺炎的風險。

麻醉後的動物單獨放在一(yī)個籠子裏進行恢複。

恢複期間繼續提供額(é)外的保溫。

當動物能夠走(zǒu)動時,將其送回原籠中子,並提供飼料和水。

根據所進行的手(shǒu)術,為了避免(miǎn)同籠夥(huǒ)伴啃縫(féng)線或切口(kǒu)處(chù)的創(chuàng)傷,小鼠可能需要(yào)在術後階段單獨飼養。任何單獨(dú)飼養的計(jì)劃(huá)都應包括在IACUC方(fāng)案中,以便進行審查和批準。

02、麻醉藥物和程序

吸入麻(má)醉劑: 異(yì)氟烷是首選的吸入麻(má)醉劑。 起效快(kuài)、恢複可靠。

A. 吸入麻醉可以通(tōng)過滴瓶法、誘導室(shì)、麵罩或氣管插管使用精密蒸汽器進行(háng)。

i.滴瓶法:

a.請勿使小鼠直接接觸液體(tǐ)吸入麻醉劑(可通過在棉花或紗布上放置不可滲透的網格(gé)來實現)。

b. 由於無法控製室內的麻醉劑濃度,並且濃度可能迅速達到有毒水平,因此該方法僅適用於非常短的手術,如(rú)尾(wěi)部活檢、皮下腫瘤植入或(huò)麵罩麻(má)醉前的誘導(dǎo)。

ii.誘導室、麵罩(zhào)和氣管插管:

a.這些需要配備氧氣源和精密蒸發器的氣體麻醉機。一些研究單位可能使用(yòng)室內(nèi)空氣而不是純氧(yǎng)作為氣源,這也是可接受的。

b.蒸發器必須與特定的吸入麻醉劑兼容。

c.由於小鼠呼吸能力較(jiào)小,使用非循環呼吸係統。

iii. 當使用吸入性麻醉(zuì)時,使用通風櫃或配備氣(qì)體清除係統的麻醉係(xì)統,以盡量減少職業暴(bào)露於排出氣體。

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B. 注射(shè)麻醉劑(jì):氯胺酮(tóng)/賽拉嗪聯合使用是小鼠的首選注射麻醉劑。

下麵列出了其他常(cháng)用(yòng)的注射劑。

i. 小鼠對各(gè)種麻醉藥的敏感性差異顯著。 年(nián)齡、體質、品係、健康狀況、基因調控和性別等因素都可能影響麻醉敏感(gǎn)性。以下劑量僅為一般指導原(yuán)則,基於上述因素可能存在顯著差異。在您的方案中(zhōng)添加麻醉劑時,建議提供一個範圍,以允許根(gēn)據每隻動物的特定需求進行給藥(yào)。

ii. 不(bú)建議在小鼠(shǔ)中進行肌肉注射(IM),因為可能導致組織刺激、跛行和自殘等並發症。

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*一(yī)個(gè)很好的初(chū)始方案(àn)是 100 mg/kg 氯胺酮和 7 mg/kg 塞拉(lā)嗪。

**阿替美唑(5 mg/mL)是右美托咪定(0.5 mg/mL)濃(nóng)度(dù)的 10 倍。

您需要 4-6 倍於右美托咪定體(tǐ)積(jī)的阿替美唑(5 mg/mL)來逆轉右美托咪定(dìng)。然而,阿替美唑的安全(quán)範圍非常高,因此如果逆轉非常緊急,給予右美托咪定(dìng)等體積的阿替(tì)美唑,可使(shǐ)阿替美唑(zuò)的劑量增加 10 倍,這是(shì)安全的。

同樣,使用(yòng)與塞拉嗪(20 mg/mL)等體積的阿替美唑 (5 mg/mL) 逆轉(zhuǎn)也有效。雖然塞拉嗪具有(yǒu)更高的濃度(20 mg/mL),但阿替美唑(5 mg/mL)更純淨,且與α2 受(shòu)體結合更緊密(mì),因(yīn)此等體積逆轉塞拉嗪也可行(háng)。

C. 注射麻醉劑的一(yī)種類型是局部麻醉劑。

i. 局麻藥通過特異性結合神經細胞膜上的電壓門控 Na + 通道(dào)來阻斷神經衝動。

ii. 給藥途徑包括粘膜(鼻、眼等)局(jú)部給藥或(huò)直接注射(shè)到組織(zhī)和神經束周圍。

iii. 在疼痛刺激(如切口)之前給予局部麻醉劑被認為是輔助鎮痛藥物,與阿片類和 非(fēi)甾體抗炎藥(NSAID)一起使用。

iv. 由於持續時間較短(duǎn)(數小時),不鼓勵將局部麻醉劑(jì)作為(wéi)主要鎮痛藥(yào)物使用,

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03、對小鼠麻醉的特殊考慮:仔鼠麻醉(zuì)

目前文獻中描述了幾(jǐ)種(zhǒng)適用於新生齧齒動物的麻醉方法,包括注射麻醉、吸入麻醉和低溫麻醉。 

新生(shēng)齧齒動物的麻醉會導致親代(dài)啃食後代的問題。可通過確保新生(shēng)仔鼠完全恢複後(hòu)再歸還給母鼠來減少這種(zhǒng)情況。其他措施包括讓幼仔接觸來自(zì)於母鼠籠中(zhōng)的汙染墊料(liào),並將幼仔放在(zài)窩仔中間位置。

低溫麻醉

低溫麻醉隻適用於7日齡以下的新生齧齒動物,並且不應用於持續(xù)時間(jiān)超過(guò)30分鍾的手術。

動物不應直(zhí)接(jiē)置於冰上(shàng)(在動物和底層冰浴之間使用乳(rǔ)膠手(shǒu)套或其他物質)。

當足(zú)部反射消失時,動物已達到適當的麻醉水平。

手術(shù)過程中(zhōng)請勿使用白熾燈,因為它會使手術區域變熱,導致動物從手術麻醉狀態中(zhōng)蘇醒。

麻醉後,動物應(yīng)緩慢複溫。快速升溫可能會導致(zhì)組(zǔ)織損傷。可使用循環水毯、加熱墊 (40℃) 或培養(yǎng)箱 (33℃) 中給動物重新升溫。

幼仔能夠(gòu)在無直接物理刺激的情況下移動後,可將(jiāng)其歸還給母鼠。

吸入麻醉

新生齧齒動(dòng)物可能比成年齧齒動物需要更長的吸入麻醉誘導時間。

在麻醉盒中進行誘導通常需 5% 異(yì)氟烷,維持(麻醉誘導盒或鼻錐)需 1-2%(流速 = 0.3-0.6 L/min)。

注射麻醉

氯(lǜ)胺酮/塞拉嗪是 7 日齡以上(shàng)小鼠的推薦注射麻(má)醉劑:通過 27g 針頭 IP 注射 50-150 mg/kg 氯(lǜ)胺酮和 5-10 mg/kg 塞拉(lā)嗪(最大體積 = 0.5 mL)。

對於7日齡以上的小鼠,推薦使用氯胺酮/塞拉嗪作(zuò)為(wéi)注射(shè)麻醉劑:使用27g針頭腹腔注射50-150 mg/kg氯胺酮和5-10 mg/kg塞拉嗪(最大體積=0.5 ml)。

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