非人靈長（zhǎng）類動物（NHP）精液樣本采集有（yǒu）多種目的，包括生殖研究（jiū）、物種保護、傳染病研究以及在藥物開發（fā）過程（chéng）中評估生殖安全性（xìng）。在生物醫藥研究中最常見的精液采集方法是電刺激和陰莖振動刺激。電刺激是（shì）利（lì）用電（diàn）流刺激NHP動物產生射精的（de）過（guò）程。最（zuì）常用的電刺（cì）激（jī）方法是直腸探針電刺激法（RPE）和陰莖電刺激法（PEP）。據報道，直腸探針（zhēn）電刺激產（chǎn）生的樣品精子濃（nóng）度低於陰莖電刺激。因此，它通常被認為不太適合於精液樣本的定量評價（jià），而用（yòng）於定性分析。陰莖電刺激最常用於收集（jí）精子進行定量分析（xī），例如，測定精子數量和/或濃度，因為該方法采集到的精液量較大。而對（duì）於小型非人靈長類動物（如鬆鼠猴和狨猴），陰莖振動刺激法（PVS）是比電刺激法更優的采精（jīng）方法，因為它（tā）更適合這（zhè）些動（dòng）物（wù）的生（shēng）理特點，同時（shí）對動物的福利（lì）影響較小。

直腸探針電刺激法（fǎ）（RPE）

描述：這是較早使（shǐ）用的NHP采精（jīng）方法。通過直接刺激盆腔（qiāng）器官周圍的神經肌肉，導致盆腔器官收（shōu）縮和放鬆，從而排出內（nèi）容物。該過程需要對動物（wù）進行輕度麻醉，但不需要對動物進行訓練（liàn）。操作者的技術和培訓對程序的成功至關重（chóng）要。

操作步（bù）驟：動物被輕度麻醉後側臥或在保定架上俯臥，使用合（hé）適大小的探針，在插入探針前，電極需輕磨（mó）、衝洗和消毒。陰（yīn）莖被輕輕拉出並清潔（可（kě）用無（wú）菌生（shēng）理鹽水），然後在探針（zhēn）上塗上一層薄薄的水溶（róng）性潤滑凝膠。探針電極需對（duì）準前（qián）列腺，為了確（què）保電極（jí）與前列腺接觸，可將（jiāng）探頭的另（lìng）一端抬起，輕輕向下按壓探頭的（de）尖端。通過逐漸增加電壓直到動物出現（xiàn）腿部伸展等反應，確（què）定動物的電（diàn）壓（yā）設定（dìng）點。達到反應點（diǎn）後（hòu），電壓保持不變一段時（shí）間（最多約（yuē）5秒），然後逐漸降低。這種電壓的逐步增加、保持和降低構成了一個完整的刺激周期。通過多次刺激，通常三組刺激可以產生（shēng）射精。在整個刺激過程中，陰莖的尖（jiān）端需要保持在預熱的玻璃燒杯或其他收集容器上方。

適用場景：由於（yú）這個方法產生的樣本精子濃度較低，因此更適合用於定性分析（xī），如檢測精液中精子的存在（zài）以確認性成熟，以及（jí）評（píng）估精子細胞的形（xíng）態。

陰莖電刺（cì）激（jī）法（PEP）

描述：該方法（fǎ）通過刺激陰莖中的傳入神經末梢，隨後（hòu）將刺激傳遞到與陰莖勃起和射精相關（guān）的（de）傳出神經通路。該方法在動物清醒狀（zhuàng）態下采（cǎi）集，傳統的保定方式是使用猴杆或者頸（jǐng）圈將動物固定在開放式的猴椅上，但（dàn）近（jìn）期有研究表明使用封閉箱（xiāng）椅（closed box chair）是一種更（gèng）優化的保定方式（shì），可（kě）以訓練動物直接從籠子進入封（fēng）閉箱（xiāng）椅內，對動物福利、精液質量都有顯著改善。PEP已被證明能夠更好地刺激整（zhěng）個生殖（zhí）道，並（bìng）且由於（yú）無需麻醉，減少了尿液汙染和（hé）精液樣本稀釋的問題。此外，與直腸探（tàn）針法相關的逆行（háng）射精（精液進入膀胱（guāng））的風險在陰莖電刺激法中被最小化。這種非侵入（rù）性技術確實需要對（duì）動物進行訓練，並且需要控製實驗（yàn）環境（例如安靜的房間、熟悉動物的工（gōng）作人員）。與直腸探針電刺激技術相比，這種方法可能需要更長的時間來獲取樣本，但通常不會超過（guò）幾分（fèn）鍾。陰莖電刺激法的一個潛在缺點是，有些動物對陰莖（jīng）刺（cì）激沒有反應，因此無（wú）法提供精液樣本（běn）。

操作步驟：將陰莖輕輕拉出，用（yòng）潤滑凝膠包裹的除顫（chàn）器墊（diàn）包裹陰莖，將電極連接到電刺激器（qì）設備上。從低電壓（yā）開始刺激（根據動物的品種和體格）不超過15秒，逐漸增（zēng）加到預（yù）設的最大值。每次刺激時，觀察動物的生理（lǐ）反應和射精，整個過程通常不超過3次刺激。不同品種的電壓刺激（jī）相差較大，對於食蟹猴（hóu）而言，可以從10-30伏特開始，如果需要（yào），可以以 5-10 伏特的增量逐（zhú）步增加，最高至約50 伏特。在刺激過程中將收集（jí）管放在陰莖尖端以收集射精的精液樣本（běn）。

適用場景：該方法適用於需要較高精子數量和質量的場（chǎng）景，如體外受精（IVF）或單精子卵胞漿內注射（ICSI），因為其（qí）能獲（huò）得更高的精液量（liàng）和精子濃度。

陰莖（jīng）振動刺激法（PVS）

描述：該（gāi）方法利用自然反射，產生正（zhèng）常的射精反應，從而獲得自然射精。使用經（jīng）過改裝（zhuāng）的振動設備，並配備收集容器。該方法通常將清醒的動物保定在猴椅上，並在黑（hēi）暗的房間（jiān）中（zhōng）進行，避免動物過於激動。

操作步（bù）驟：將（jiāng）陰莖輕輕從包皮鞘中拉（lā）出，將振動玻璃管放在陰莖尖端並（bìng）保（bǎo）持接觸（chù）。根據動物對刺激的反應逐（zhú）漸調整振動參數，並在刺（cì）激期間提供休息時間。如（rú）果在15-20分鍾（zhōng）內未達到射（shè）精，則停止刺激。

適用場景：在（zài）小（xiǎo）型（xíng）非人靈長類動物（如鬆鼠猴和狨猴）中，PVS是首（shǒu）選方法，因為這（zhè）些動物體型較小，直接放置電極進行陰莖刺激較為困（kùn）難，且直腸探（tàn）針法在這些小型（xíng）NHP物（wù）種中也不太適（shì）用，較小的生殖道和消化（huà）道結構可能無法讓（ràng）直腸探針精準放置。

同時，對鬆鼠猴和狨猴的研究發現，與 RPE 采集的樣本相比，振動刺（cì）激采集的精液樣本中（zhōng）精子（zǐ）和附屬腺的產生顯著增加。PVS 可產生質量更高的射精（jīng），結合了不需（xū）要鎮靜或輕度麻醉的優點，幾乎不引起不適，並產（chǎn）生（shēng）無汙染的自然射精。

無論采用何種精液采集方法，均應慎重考慮采精動物的選擇。確認精子發生（通過檢測精液中的精子）是確認 NHP 性成熟（shú）的最可（kě）靠方法。在一（yī）些 NHP 種屬中，精液采集時間應考（kǎo）慮季節性。在此類確認之前，可通（tōng）過應用常規（guī）選擇標準（如年齡、體重和/或睾丸體積）優化動物的選擇。睾酮由於其脈衝式/晝夜節律性波動和動物間個體差異較大，並不是可（kě）靠判定性成（chéng）熟（shú）的指標。

性（xìng）成（chéng）熟的具體標準還取決於動物的種屬（shǔ）甚至地理（lǐ）來源。例（lì）如，來自毛裏求斯（sī）的（de）食蟹猴已被證實從 3-4 歲開始性成熟（shú）（精液中的精子），而來自亞（yà）洲大（dà）陸的食蟹猴需要額外一年（> 4 歲）才能達到性成熟。關於食蟹猴和恒河猴的文獻表明（míng），小於4歲和體重小於（yú）4kg的動物不太可（kě）能（néng）性成熟。

精液采（cǎi）集操作的福利考（kǎo）量

在精液采集時，也應關注（zhù）動物福（fú）利的問題，比如直腸探（tàn）針電刺激法（RPE）比其他采精技（jì）術更具侵入（rù）性，因為該方法（fǎ）需要將探針插（chā）入動物的直腸，直接刺激前列腺和盆（pén）腔（qiāng）器官，可能會對動物造成一定的不適或（huò）潛在的生理損傷。因此在（zài）進行直腸探針電（diàn）刺激前，應仔細檢查（chá）直腸是否存在（zài）異常，如瘢痕、狹窄（zhǎi）或（huò）痔瘡。操作（zuò）者需要密切監控動物的反（fǎn）應和身體狀（zhuàng）況，定期檢查是（shì）否有出血或組織損傷的跡象（xiàng）。一旦發現異常，應立即停（tíng）止操（cāo）作並給予（yǔ）動物（wù）恢（huī）複的時間。同時，提供必（bì）要的操作（zuò）後（hòu）護理和采精頻率的限製也是確保動（dòng）物福利的重要（yào）措施。

而陰莖（jīng）電刺激和陰莖震動刺激法雖然無創，動物（wù）也是無（wú）需麻醉在猴椅或者封閉箱椅中操作，因（yīn）此操作過程中應關注的是對動物進行馴化和保定適應，減少動物的應激。同時在電刺（cì）激時應嚴格控製給予刺激的電流，以及電刺激的（de）次數。

通（tōng）過上文描（miáo）述，可以看出選擇（zé）合（hé）適的動物以及合（hé）適的方法才能夠（gòu）采（cǎi）集到合適的樣本（běn），同時應關注動物的福利問（wèn）題，最大程度減少對動（dòng）物的（de）不利影響。