骨髓穿刺抽吸技術  

骨髓穿刺抽吸技術的（de）早期發（fā）展（zhǎn）主要集中在人類醫學領域，隨後逐漸應用於動物研究。最初的技術較為簡單，主要用於（yú）獲取骨髓樣本以進（jìn）行（háng）血液學和（hé）病理學分析。隨著研究（jiū）需求（qiú）的增加，骨髓穿刺抽吸的技術（shù）逐漸（jiàn）得到了改進和優化，設備（bèi）改進方麵引入了專用的骨髓穿刺針，這（zhè）些穿刺針具備更好的設計可以減少組織損傷和提高樣本質（zhì）量（liàng），以及在操作過（guò）程中引入（rù）嚴格（gé）的無菌技術以減少感染的風險。

骨髓穿刺技術不（bú）僅在醫學研究中得到廣泛應用（yòng）還擴展到多個領域（yù）。藥物研發，評估新藥對骨髓的影響，尤（yóu）其是抗癌藥和免疫抑製藥物的研究中（zhōng）；毒理學（xué）研究中，同樣需要研究（jiū）有（yǒu）毒物質對骨髓的影響；此外，基因治療，通過獲（huò）取骨髓細胞進行基因組研究和基因編輯實驗等都需要（yào）進行骨髓穿刺。本文將介紹實驗犬的骨髓穿刺抽吸技術（shù）。

采集部位

對於犬，骨髓樣本通常從股骨轉子窩、肱（gōng）骨近端或髂骨翼采集，其他部位包括胸骨、肋骨。如果骨盆和股骨區域含有豐富的脂肪組織（zhī），采集（jí）則會（huì）變得更具挑戰性。下文主要講（jiǎng）述犬肱骨近端骨髓采集的操（cāo）作程序。

肱骨近端骨髓（suǐ）采（cǎi）集

材料和設備

○ 無菌手套

○ 電（diàn）動剪毛器和清潔（jié）溶液

○ 局部麻醉藥（yào）（如利多卡因、布比卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二胺四乙酸溶液（EDTA約2 mL）的培養皿

○ 玻璃顯微鏡載玻片

○ 顯微（wēi）血細胞比容（róng）毛細血管（圖A），有（yǒu）毛細血管球

○ 11號手術刀片

○ 無菌紗布

○ 10或12ml注射器（qì）

○ 14G至18G帶針芯的骨髓針（圖（tú）B和C）

A：骨髓穿刺（cì）所需的材料和設（shè）備

B：帶蓋和針芯的穿刺針

C：已移除蓋（gài）和針芯的穿（chuān）刺針

操作步驟（zhòu）

1、在進行深度鎮靜（jìng）或全身麻醉後，動物側臥位，修剪采集部位的毛發，可以在采集部位皮（pí）下注射局部麻醉劑（如利多卡因、布比卡因），采集部位無菌清洗。如圖1A。

圖1A：動物側臥位，采集部位的毛發（fā）已剔除。

2、打開並佩戴無菌手（shǒu）套。助（zhù）理輔助將穿刺針（zhēn）、注射（shè）器和手術刀片打開並放入無菌區域，或將這些物品（pǐn）以無菌的方式遞給術者。使用10或12ml的注射器，在保持無菌的情況下，抽取約1ml的EDTA溶液。如圖1B 。

圖1B：從培養皿中抽（chōu）取EDTA溶液

3、將注射器放置在無菌區域內。移除穿刺針的蓋子和針芯，通過順時針旋轉確保針頭的防護裝置牢固地連接在（zài）針頭的基部。將含有EDTA的注射器連接到針頭的頂部並旋緊。通過將EDTA噴回培養皿來灌注針頭，留下約0.5 mL的EDTA在注（zhù）射器（qì）中。灌注（zhù）時保持在培（péi）養（yǎng）皿上方（fāng），不要讓無菌針頭的尖端接觸培養（yǎng）皿，然後將注射器從針頭上移除，置於（yú）無菌區域內。重新裝上針芯和蓋子。注：在（zài）大型犬中，可以移除針頭防護（hù）裝置，以（yǐ）方便進入髓腔（qiāng）。如圖1C。

圖1C：用EDTA溶液灌注穿刺針

4、觸摸並確定肱骨近端外側的平坦區域，位於大結節的（de）遠端。確定肩（jiān）胛骨和肱骨之間的肩關節，以確保不會誤采到該區（qū）域。在平坦區域正上方的皮膚上切開一個小口。如圖1D。

圖1D：在肱骨近端外側的平坦區域切開一個小口（kǒu）

5、牽拉皮膚，將針頭“彈入（rù）”切口，確保針頭已穿透深層皮下組織（zhī）。重（chóng）新確認肱（gōng）骨近端外側的平坦區域，位於大結節的遠端。將針尖直接放在骨頭上（shàng），垂直於平麵。以（yǐ）順時針和逆時針旋轉的方式適度施（shī）加壓力，直至針（zhēn）頭穿透近端骨皮質。穿透皮質後，減小（xiǎo）角度，使針頭（tóu）朝向肘部，平行（háng）於髓腔。繼續扭轉（zhuǎn），直到針完（wán）全嵌入骨內。如圖1E。

圖1E：穿刺針彈（dàn）入切口

6、移除蓋子（zǐ）和（hé）針芯，並迅速連接含有EDTA的注射器。抽吸至可見紅骨髓（2 ~ 5 mL足夠（gòu）），並將內容物排出到培養皿。如圖1F。

圖1F：將骨髓吸入裝有EDTA的注射器

7、骨（gǔ）髓包含在白色的針狀物中（zhōng），表明穿刺成（chéng）功。使用毛（máo）細管（guǎn）或帶有毛細管球或移液管球的巴斯德移液管取出（chū）並排出這（zhè）些（xiē）顆（kē）粒，用於（yú）血塗片製備。每（měi）片至少需要（yào）1個針狀物；然（rán）而，建議每張（zhāng）載玻片至少（shǎo）有3 ~ 5個較大的針狀物，以進行充（chōng）分評估。任何（hé）剩餘的骨髓內容物都可以收集到EDTA管中（zhōng），並與載玻片一起送往實驗室。如圖1G。

圖1G：使用巴斯德吸管取出顆粒以製備血塗片

8、在動物恢複（fù）後給（gěi）與鎮痛藥物（wù），並根據需要繼續使（shǐ）用。

潛在的不良反應、緩解措施或治（zhì）療方法

1、采樣部位感染，但這種情況很少見

2、對軟組織如神經（jīng）、肌肉和關節表麵的創（chuàng）傷

3、采樣部（bù）位出血

4、術後疼痛（tòng）

緩解措施

○ 密切注意無菌技（jì）術

○ 仔細（xì）辨別解剖標誌，準備骨（gǔ）骼/骨標本以正確找到解剖標誌，避免對周圍（wéi）組織造成意外創傷

○ 對采樣部位施加直接壓力，髓內（nèi）出血不會（huì）引起大的問題，因為血液會迅（xùn）速被吸收

○ 術後疼痛通常（cháng）是短（duǎn）暫的，鎮痛藥用作鎮靜/麻醉的預藥通常是足夠（gòu）的，但如果需要（yào）也可以在術後使用

小結

為了提高骨髓穿（chuān）刺抽吸的（de）成功率和樣本質量（liàng），必須製（zhì）定全麵的標（biāo）準（zhǔn）操作程序（SOP），涵蓋動（dòng）物準備、麻醉管理、穿（chuān）刺操作及（jí）樣本處理等各個環節，並對實驗人員進行係（xì）統且廣泛的培訓。此外，實驗研究人員應持（chí）續優化和改進技術（shù），精細（xì）化操作流程，提升效率（lǜ）與準確性，從而為生物醫（yī）學研究提供高質量的樣本和可靠的數（shù）據支（zhī）持。